Investigation of Tritrichomonas foetus in cryopreserved bovine semen by culture and polymerase chain reaction / Pesquisa por Tritrichomonas foetus em sêmen bovino criopreservado mediante isolamento e reação em cadeia da polimerase

Bovine Trichomoniasis (BT) is an infectious disease caused by Tritrichomonas foetus that can be transmitted either sexually or by fomites. In males, the disease is asymptomatic and permanent. T. foetus has been detected in semen samples where it is able to remain viable even when frozen. The objective of this study was to investigate the presence of T. foetus in 27 samples of commercial frozen bovine semen by culture and Polymerase Chain Reaction (PCR). Samples were thawed in water at 37°C. Part of the samples was inoculated in a test tube containing Diamond's medium and incubated at 35°C. Growth was evaluated every 24 hours via direct examination under a microscope. The other part was placed in an Eppendorf tube and frozen for later molecular analysis. After 10 days of culture, all samples were negative for T. foetus. The Quick-DNA Miniprep Kit (Zymo Research) without proteinase K was used for DNA extraction. The primers used in PCR were TRF3 and TRF4. PCR results were negative for all samples. In conclusion, bovine semen samples were negative for T. foetus in both diagnostic methods, according to the adopted methodology.(AU)

A tricomonose genital bovina (TGB), uma doença infectocontagiosa causada pelo Tritrichomonas foetus, é transmitida por via venérea e fômites contaminados. Em machos a doença é assintomática e permanente. O agente já foi encontrado em amostras de sêmen e é capaz de permanecer viável quando congelado. Este trabalho teve por objetivo investigar a presença de T. foetus em 27 amostras de sêmen bovino comercial congelado, por meio de cultivo e reação em cadeia da polimerase (PCR). As amostras foram descongeladas em água a 37ºC; parte foi inoculada em tubo de ensaio contendo meio Diamond, incubada a 35ºC com consequente avaliação de crescimento e avaliada a cada 24 horas, via exame direto em microscópio, e a outra parte foi diluída em PBS para análise molecular. Após 10 dias de cultivo, todas as amostras foram negativas. Para a detecção molecular foi utilizado o kit Quick-DNA Miniprep (Zymo Research) sem proteinase K para extração do DNA. Os iniciadores utilizados na PCR foram TRF3 e TRF4. O resultado da PCR foi negativo para todas as amostras. Conclui-se que as amostras utilizadas foram realmente negativas para a presença do patógeno em ambos os métodos diagnósticos, o que comprovou a inocuidade do sêmen testado.(AU)

Detection of Leishmania infantum in the smegma of infected dogs / Detecção de Leishmania infantum no esmegma de cães infectados

Considering the venereal transmission of visceral leishmaniasis from dogs to bitches, the aim of this study was to verify if the penile surface and smegma from infected dogs can be the source of parasites in bitches. Twelve Leishmania infantum infected dogs had semen and smegma samples collected for submission to PCR identification of the DNA of the parasite. Semen (41.7 percent) and smegma (50.0 percent) have similar positive incidence (P>0.05; Fisher's exact test), with 58.3 percent of the dogs positive for semen and/or smegma samples. The proportion of positivity for both semen and smegma was 33.3 percent, but 8.3 percent was positive only for semen, and 16.7 percent only for smegma, revealing a moderate agreement between tests (K=0.5; Kappa index). It was concluded that Leishmania infantum is present in the smegma of contaminated dogs and it can be a source of parasites for the semen and the bitch...

Tendo em vista a transmissão venérea da leishmaniose visceral do cão para a cadela, o objetivo deste estudo foi verificar se a superfície peniana e o esmegma de cães infectados poderiam ser a fonte de parasitas para a fêmea. Amostras de sêmen e esmegma de 12 cães infectados com Leishmania infantum foram submetidas à identificação do DNA do parasita por PCR. As incidências de positividade no sêmen (41,7 por cento) e no esmegma (50,0 por cento) foram semelhantes (P>0,05; teste exato de Fisher), sendo 58,3 por cento dos cães positivos para sêmen e/ou esmegma. A positividade para sêmen e esmegma juntos ocorreu em 33,3 por cento, mas em 8,3 por cento dos casos apenas no sêmen, e em 16,7 por cento apenas no esmegma, o que revela uma concordância moderada entre os testes (K=0,5; índice Kappa). Conclui-se que a Leishmania infantum está presente no esmegma de cães contaminados, podendo ser a fonte de parasitas para o sêmen e a cadela...

Infecciones de transmisión sexual en semen: el hombre como vector de transmisión / Sexual transmission infections in semen: men as vector transmission

En los últimos años el estudio de las infecciones de transmisión sexual ha cobrado gran importancia debido principalmente al incremento de estas en parejas heterosexuales y hombres que tienen sexo con hombres. En mujeres existe mucha información de epidemiología y patogénesis de estas infecciones, sin embargo, en hombres la información es muy escasa debido a que la mayoría no presenta sintomatología. En los últimos años se ha evidenciado un creciente interés en el estudio del semen como vía de transmisión, debido principalmente a la afinidad de algunos patógenos con los espermatozoides. Dentro de los principales microorganismos infectantes en semen se encuentran Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mollicutes, Virus de la Inmunodeficiencia Humana tipos 1 y 2, Virus Herpes Simplex 1 y 2, Virus Papiloma Humano, Virus de la Hepatitis B y C, Citomegalovirus, Virus Epstein-Barr y Trichomonas vaginalis.

Sexually transmitted infections study has become an important issue in these days, mainly due to the increment of heterosexual and men have sex with men partners of people. In women, there is a lot information about epidemiology and pathogenesis of these infections. However, the information is very limited in men, because most infected men are asymptomatic. In recent years, there has been an increasing interest in study of semen as a transmission way, due to the affinity of some pathogens to sperm. The most prevalent microorganisms infecting semen are: Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Mollicutes, Human Immunodeficiency Virus Types 1 and 2 Herpes Simplex Virus 1 and 2, Human Papillomavirus, Hepatitis B and C virus, Cytomegalovirus, Epstein-Barr and Trichomonas vaginalis.

Associação entre proteínas do plasma seminal, motilidade e viabilidade espermática em coelhos submetidos a doping genético / Association among seminal plasma proteins, sperm motility and sperm viability in rabbits submitted to gene doping

Neste trabalho foi estudada a correlação entre o perfil proteico do plasma seminal e a motilidade e viabilidade espermática em coelhos submetidos ao tratamento com vetores de expressão contendo o gene da eritropoetina (EPO) e com EPO recombinante humana. Foram identificadas, em coelhos submetidos ao tratamento com vetor de DNA contendo o gene da EPO, duas bandas proteicas associadas a alterações na motilidade espermática - 48kDa à baixa motilidade (P<0,05) e 18kDa à alta motilidade (P<0,05) - e esse fator foi associado a maior viabilidade espermática (P<0,05). Em coelhos submetidos ao tratamento com EPO recombinante, um fator proteico, 63kDa, associou-se à alta motilidade espermática (P<0,05), enquanto dois, 26 e 40kDa, foram associados à alta viabilidade espermática (P<0,05). Esses resultados sugerem que o doping genético pode ocasionar mudanças no perfil proteico do plasma seminal, provocando alterações na motilidade e viabilidade espermática.

In this study the correlation between seminal plasma protein profile and the sperm motility and sperm viability in rabbits submitted to treatment with an expression vector containing EPO gene and with human recombinant EPO was evaluated. In rabbits submitted to treatment with EPO expression vector, two protein bands were associated to sperm motility - 48kDa associated to low motility (P<0.05) and 18kDa to high motility (P<0.05) - and this protein band was also associated to high sperm viability (P<0.05). In rabbits submitted to treatment with human recombinant EPO, a protein factor, 63kDa, was associated to high sperm motility (P<0.05) while two protein factors, 26 and 40kDa, were associated to high sperm viability (P<0.05). These results suggest that gene doping leads to changes in rabbit seminal plasma protein, altering sperm motility and sperm viability.

Detection of Toxoplasma gondii in the reproductive system of male goats / Detecção de Toxoplasma gondii no sistema reprodutor de caprinos machos

Male goats of mating age serologically negative for Toxoplasma gondii were divided into three groups: GI - controls (placebo) (n = 2); GII - infected with 1 × 10(6) tachyzoites (RH strains) (n = 2); and GIII - infected with 2 × 10(5) oocysts (P strains) (n = 2). Clinical, hematology, parasite and serology tests and studies of parasites in the semen through bioassay and polymerase chain reaction (PCR), and in reproductive organs (bioassay) were performed to assess toxoplasma infection. Serological titers peaked at 4096 in two animal groups infected with the protozoan. The bioassays allowed an early detection of protozoa in semen samples of tachyzoite-inoculated animals. T. gondii DNA was identified through PCR in the semen in five (Days 5, 7, 28, 49, and 70) and two (both at day 56) different days post-inoculation in GII and GIII animals, respectively. It was also possible to detect T. gondii DNA in reproductive organs (prostate pool, testicles, seminal vesicle and epididymis) of goats inoculated with either tachyzoites or oocysts. The present study suggests the possibility of venereal transmission of T. gondii among goats and it should be further assessed.

Caprinos machos, em idade reprodutiva, sorologicamente negativos para Toxoplasma gondii foram distribuídos em três grupos de animais: GI (n = 2) controle (placebo), GII (n = 2) - infectado com 1 × 10(6) taquizoítos (cepa RH) e GIII (n = 2) infectado com 2 × 10(5) oocistos (cepa P). Exames clínicos, hematológicos, parasitêmicos, sorológicos, pesquisa no sêmen e em tecidos do sistema reprodutor, por meio da bioprova, e da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), foram conduzidas para avaliar a infecção toxoplásmica. Os títulos sorológicos alcançaram valores máximos de 4096 nos dois grupos de animais infectados. Pela técnica da bioprova, foi possível revelar precocemente a presença do coccídio nas amostras seminais dos animais inoculados com taquizoítos. Pela PCR, foi possível identificar, no sêmen, material genético de T. gondii, em cinco (5º, 7º, 28º, 49º e 70º) e em duas (ambos ao 56º) datas experimentais pós-inoculação dos animais pertencentes aos grupos GII e GIII, respectivamente.Por esta mesma técnica, foi possível ainda isolar material genético deste protozoário, também em amostras teciduais (pool de próstata, testículo, vesícula seminal e epidídimo) dos caprinos inoculados com taquizoítos e oocistos. A presente pesquisa sugere a possibilidade da ocorrência da transmissão sexual do T. gondii na espécie caprina.

Toxoplasma gondii in semen of experimentally infected swine

Eight reproductive boars were divided into three groups and inoculated with Toxoplasma gondii [GI (n=3) 1.5x10(4) oocysts strain P; GII (n=3) 1.0x10(6) tachyzoites strain RH; and GIII (n=2) non-inoculated control]. Clinical, hematological, parasitemia and serological tests and studies of the parasite in the semen through bioassay and PCR, and in reproductive organs (Bioassay and immunohistochemical analyses) were conducted to evaluate the toxoplasmic infection. Blood and semen were collected on day -2, -1, 1, 3, 5, 7, 9, 11, 14 and weekly up to 84 days post-inoculation (DPI). No clinical or hematimetric alteration was observed in the boars. Parasitemia was detected in one boar inoculated with oocysts at the 7th DPI and in another boar infected with tachyzoites (GII) at the 3rd and 49th DPI. Serological tests revealed antibodies against T. gondii in animals inoculated with oocysts or tachyzoites at the 7th DPI with dilutions of 1:256 and 1:64, which reached peaks of 1:4096 at day 11 and 9, respectively. The bioassays revealed the presence of the parasite in semen samples of a boar inoculated with oocysts (GI) at 3, 49 and 56 DPI and from two boars infected with tachyzoites (GII), one animal at 5 and two animals at 49 days DPI. Mice inoculated with semen from the control group (GIII) remained serologically negative. PCR analysis showed T. gondii DNA in the semen of Boar 1 and Boar 3 inoculated with tachyzoites and oocysts, respectively. The immuno-histochemical tests showed T. gondii in the reproductive organs of Boar 1 and Boar 2, inoculated with tachyzoites and oocysts, respectively. These findings suggest the possible occurrence of venereal transmission of T. gondii in swine.

Oito reprodutores suínos foram divididos em três grupos e inoculados com Toxoplasma gondii [GI (n=3) 1.5x10(4) oocistos cepa P; GII (n=3) 1.0x10(6) taquizoítos cepa RH, e GIII (n=2) controle, não inoculados]. Exames clínicos, hematológicos, de parasitemia e sorológicos foram realizados para avaliar a infecção toxoplásmica. Pesquisa do parasito no sêmen, por meio do bioensaio e pela técnica da PCR, e em órgãos do sistema reprodutor (bioensaio e imunohistoquímica) foi realizada. Sangue e sêmen foram colhidos nos dias -2, -1, 1, 3, 5, 7, 9, 11, 14, e semanalmente até o 84º dia pós-infecção (DPI). Nenhuma alteração clínica ou hematimétrica foi observadda nos animais. Parasitemia foi detectada em um animal inoculado com oocistos no 7º DPI e em outro inoculado com taquizoítos (GII) nos 3º e 49º DPI. A sorologia revelou a presença de anticorpos contra T. gondii nos animais inoculados com oocistos ou taquizoítos no 7º DPI com títulos de 1:256 e 1:64, que atingiram picos de 1:4096 nos dias 11 e 9, respectivamente. O bioensaio revelou a presença do parasita em amostras seminais de um animal inoculado com oocistos (GI) nos 3º, 49º e 56º DPI, e de dois animais infectados com taquizoítos (GII), um deles no 5º DPI e os dois ao 49º DPI. Pela PCR, o DNA de T. gondii foi detectado no sêmen dos Suínos 1 e 3 inoculados com taquizoítos e oocistos, respectivamente. A imunohistoquímica revelou T. gondii em órgão do aparelho reprodutor dos Suínos 1 e 2, inoculados com taquizoítos e oocistos, respectivamente. Esses achados sugerem a possibilidade da ocorrência da transmissão venérea do T. gondii em suínos.

Estudos sobre a infetividade do sêmen de camundongos inoculados com Trypanosoma cruzy: comprometimento do aparelho genital masculino na doença de Chagas experimental: alteraçäo dos plexos nervosos com destruiçäo neuronal / Studies on the infectivity of the semen of mice inoculet with Trypanosoma cruzy: incolvement of the male genital organs in experimental Chaga's disease: alterations of the nerve plexes with neuronal destruction

Com o propósito de investigar a possibilidade de transmissäo da doença de chagas pelo sêmen, camundongos adultos foram inoculados, por via intra-peritoneal, com sêmen obtido pela eletro-ejaculaçäo proveniente de camundongos infectados experimentalmentwe com trypanosoma cruzy. Foi observada uma infectividade de 91,3 por cento do sêmen, quando colhido na fase aguda, conforme demonstrado nos cortes histológicos do coraçäo, onde evidenciava-se miocarte e ninhos de amastigotas em 77 por cento. Em um segundo experimento, foi realizada a instalaçäo de sêmen e sangue infectante, em grupos distintos, sobre a mucosa vaginal. Quando a mucosa vaginal era escarnificada, além do aparecimento de miocarte verificou-se, em ambos os grupos, ninhos de amastigotas em 100 por cento dos animais. O pH vaginal e as diversas fases do ciclo estral näo influenciaram na penetraçäo dos parasitos, estando este fenômeno intimamente relacionado com a integridade da mucosa, tornando-se possível a transmissäo por acasalamento desde que haja lesäo da mesma. Concomitantemente, verificamos o comprometimento dos filetes e gânglios nervosos. Em muitos animais havia processo nítido de neurite e perineurite, bem como ganglionite com destruiçäo neuronal acentuada